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作者:365bet体育备用 发布时间:2019-11-01 阅读:
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全部展开 游泳后，需要对核酸染色以形成条带类型。通常使用以下核酸斑点：1.可将最常用的溴化乙锭（EB）核酸荧光染料插入双核酸链的成对碱基之间。紫外线激发 EB-DNA复合物的EB发出的荧光是游离凝胶的10倍，因此无需清洗底部即可清晰地观察到核酸带的模式。 如果EB背景太深，可以将凝胶浸泡在1 mmol / L MgSO4中1小时或10 mmol / LMgCl2浸泡5分钟，以使未结合的EB脱色并检测10 ng DNA样品。EB也可用于检测单链DNA或RNA，但对单链核酸的亲和力较低，且荧光产量较低。 向运行的凝胶或缓冲液中添加终浓度为0。 可以在电泳期间以5μg/ ml EB进行染色，并且可以随时观察到核酸迁移。 但是，EB具有正电荷。当插入碱基时，核酸分子的刚性增加并且迁移率降低。因此，它不适用于测量核酸的分子量。此时，电泳后凝胶浸没到0。 在水中用5μg/ ml EB染色10分钟。 EB易于分解，应在黑暗中于4°C下保存。cr啶橙（AO）：A啶橙可插入一对双链核碱基之间，并在254 nm的紫外线激发下在530 nm发射绿色荧光。通过静电结合到单链核酸的磷酸基团而在254 nm的紫外线下激发也产生了640 nm的红色荧光。 因此，可以以零灵敏度区分单链和双链核酸。 1μg和0。 05微克 但是，a啶橙茶的操作非常严格，应在22°C和0°C下进行。 01 mol / L磷酸钠缓冲液（pH 7。 0）在黑暗中浸泡30分钟，然后用搪瓷盘在4°C下用缓冲液漂白过夜或在22°C下用1-2小时漂白。 3.银试剂（Ag +）：Ag +与核酸形成稳定的络合物，并使用甲醛将Ag +还原为银颗粒。 诸如AgNO3之类的试剂可以将聚丙烯酰胺凝胶中的单链和双链DNA和RNA染成深棕色。 银染色法的灵敏度是EB染色法的约200倍，蓝色染色法是EB染色法的100至1000倍。 对于5毫米厚的凝胶，可以检测到0。 5 ng RNA的缺点是特异性低，与蛋白质和去污剂反应并产生褐色，DNA染色不准确。 银与DNA稳定结合，对DNA具有破坏作用，不适合制备要回收的DNA片段。 4.亚甲蓝（亚甲蓝）可能具有蓝色RNA，但灵敏度不高，操作时间长。 染色过程：将粘合剂浸入0。 02％亚甲基蓝，10 mmol / LTris-Ac（pH 8。 3）在4°C下放置1到2个小时，然后用清水冲洗5到8个小时（重复换水）。 
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